USŁUGA WYKONANIA BADAŃ I EKSPERYMENTÓW W CELU OKREŚLENIA WŁAŚCIWOŚCI BIOLOGICZNYCH SUBSTANCJI WYKAZUJĄCYCH DZIAŁANIE ANTYKOAGULACYJNE I PRZECIWPŁYTKOWE, WYIZOLOWANYCH Z ROŚLIN LECZNICZYCH - PAKIETY

Opis przedmiotu przetargu: 1.Przedmiotem zamówienia jest wykonanie różnego rodzaju badań, i eksperymentów, których celem jest określenie właściwości biologicznych polifenolowo-polisacharydowych substancji wykazujących działanie antykoagulacyjne i przeciwpłytkowe, wyizolowanych z wybranych roślin leczniczych. Usługa realizowana będzie na potrzeby prac prowadzonych przez zespół naukowców Zamawiającego zaangażowanych w Zadanie badawcze pn. Antykoagulanty pochodzenia roślinnego z perspektywą wykorzystania w profilaktyce i leczeniu zakrzepic. Przeciwagergacyjne właściwości preparatów roślinnych. Planowanym efektem realizacji Zadania jest otrzymanie produktu leczniczego pochodzenia roślinnego, mającego znaczenie w profilaktyce i leczeniu chorób w układzie sercowo-naczyniowym, działającego jako antykoagulant i,lub substancja przeciwagregacyjna względem płytek krwi.2.Szczegółowy zakres zamówienia został ujęty w następujących trzech Pakietach (A-C):1) PAKIET A , USŁUGA BADAŃ POTENCJALNEJ CYTOTOKSYCZNOŚCI ORAZ KANCEROGENNOŚCI IN VITRO PREPARATÓW ROŚLINNYCH METODAMI BIOLOGICZNYMI I-LUB KOLORYMETRYCZNYMI, WRAZ Z BADANIAMI ICH WŁAŚCIWOŚCI IMMUNOMODULACYJNYCH IN VITRO METODĄ IMMUNOENZYMATYCZNĄ.Pakiet A dotyczy wykonania badań w celu określenia potencjalnej cytotoksyczności oraz kancerogenności in vitro metodami biologicznymi i,lub kolorymetrycznymi, oraz badań zmierzających do określenia właściwości immunomodulacyjnych in vitro metodą immunoenzymatyczną (ELISA). Materiał badawczy stanowić będą na bieżąco przekazywane przez Zamawiającego Wykonawcy różne preparaty roślinne (max. do 10, oraz max. do 5 ich frakcji), zawierające substancje o charakterze polisacharydów, polifenoli oraz glikokoniugatów polifenolowo-polisacharydowych. Zakres zlecenia w Pakiecie A obejmuje:a)badania na standardowych liniach komórkowych wg. normy PNEN ISO 10993-5, 2009 uwzględniając co najmniej 3krotne powtórzenie eksperymentów; b)badania na komórkach endotelium, zakupionych przez Wykonawcę w banku tkanek, oraz na komórkach krwi ludzkiej od zdrowych dawców, ochotników w wieku 18 30 lat, nie stosujących na co najmniej 12 dni przed oddaniem krwi leków przeciwzapalnych, w szczególności zaburzających krzepnięcie krwi badania należy wykonać przy uwzględnieniu co najmniej 10krotnego powtórzenia eksperymentów, uwzględniając grupę kontrolną w ilości co najmniej 5krotnego powtórzenia eksperymentów, oraz grupę kontroli pozytywnej w ilości co najmniej 5krotnego powtórzenia eksperymentów, w celu oznaczenia reakcji immunologicznej, którą mogą wywoływać preparaty roślinne i,lub ich frakcje,c)badania mające na celu określenie, czy preparaty roślinne i,lub ich frakcje wykazują potencjalną mutagenność wykonane in vitro przy wykorzystaniu testów Amesa na genotoksyczność, wg. norm PN,EN ISO 10993-3:2009 i,lub PN-EN ISO 10993,12: 2009, z powtarzalnością określoną przez ww. normy,d)badania polegające na oznaczeniu poziomu co najmniej dwóch wybranych cytokin prozapalnych, w szczególności zaburzających krzepnięcie krwi, produkowanych przez komórki krwi obwodowej ludzkiej zdrowych dawców, w wieku 18 30 lat, nie stosujących na co najmniej 12 dni przed oddaniem krwi leków przeciwzapalnych, w szczególności zaburzających krzepnięcie krwi - badania powinny być wykonane w serii co najmniej 3 stężeń każdego z preparatów roślinnych i,lub ich frakcji, w zakresie nie mniejszym niż 10 do 200 µgnamL w badanym układzie eksperymentalnym, przy uwzględnieniu co najmniej 10krotnego powtórzenia eksperymentów; badania powinny uwzględniać grupę kontrolną w ilości co najmniej 10krotnego powtórzenia eksperymentów, oraz grupę kontroli pozytywnej w ilości co najmniej 10krotnego powtórzenia eksperymentów,e)badania mające na celu ocenę stopnia aktywacji transkrypcyjnego czynnika jądrowego (NF kappa B), odpowiedzialnego za produkcję immunocytochemiczną prozapalnych cytokin, przez preparaty roślinne i,lub ich frakcje; badania należy wykonać przy uwzględnieniu co najmniej 5krotnego powtórzenia eksperymentów, uwzględniając grupę kontrolną w ilości co najmniej 5krotnego powtórzenia eksperymentów, oraz grupę kontroli pozytywnej w ilości co najmniej 5krotnego powtórzenia eksperymentów, w celu oznaczenia efektu stanowiącego przedmiot badania.2) PAKIET B USŁUGA BADAŃ WOBEC PŁYTEK KRWI LUDZKIEJ, W CELU OCENY POTENCJALNYCH WŁAŚCIWOŚCI PRZECIWPŁYTKOWYCH I,LUB ANTYAGREGACYJNYCH PREPARATÓW ROŚLINNYCH ORAZ ICH FRAKCJI. Pakiet B dotyczy wykonania badań wobec płytek krwi ludzkiej, w celu oceny potencjalnych właściwości przeciwpłytkowych i,lub antyagregacyjnych. Materiał badawczy stanowić będą na bieżąco przekazywane przez Zamawiającego Wykonawcy różne preparaty roślinne (max. do. 10, oraz max. do 5 ich frakcji), zawierające substancje o charakterze polisacharydów, polifenoli oraz glikokoniugatów polifenolowo-polisacharydowych. Zakres zlecenia w Pakiecie B obejmuje:a)wykonanie badań polegających na ustaleniu w warunkach in vitro wpływu każdego z preparatów roślinnych i,lub ich frakcji, w zakresie co najmniej 10do100 µg,mL w badanym układzie eksperymentalnym na integralność błony komórkowej płytek krwi ludzkiej, pobranej od zdrowych dawców, co najmniej 10 ochotników w wieku 20 do30 lat, nie stosujących na co najmniej 12 dni przed oddaniem krwi leków przeciwzapalnych, w szczególności zaburzających krzepnięcie krwi, poprzez oznaczanie pozakomórkowej aktywności markera cytozolu dehydrogenazy mleczanowej (LDH);b)ocenę wpływu in vitro każdego z preparatów roślinnych i-lub ich frakcji na procesy agregacji płytek krwi w osoczu bogatopłytkowym z krwi pochodzącej od co najmniej 10 zdrowych dawców, ochotników w wieku 20 do 30 lat, nie stosujących na co najmniej 12 dni przed oddaniem krwi leków przeciwzapalnych, w szczególności zaburzających krzepnięcie krwi, metodą agregometryczną, w zakresie stężeń o potencjalnych właściwościach ochronnych względem płytek krwi, dla każdego z preparatów roślinnych i-lub ich frakcji, w zakresie co najmniej 10do100 µgnamL w badanym układzie eksperymentalnym; ustalenie rodzaju i stężeń preparatów i,lub ich frakcji o właściwościach przeciwagregacyjnych;c)wykonanie badań mających na celu określenie w warunkach in vitro stopnia hamowania reaktywności płytek krwi ludzkiej, pochodzącej od dawców co najmniej 10 pacjentów z chorobą sercowo-naczyniową, przyjmujących standardowe leki przeciwpłytkowe: kwas acetylosalicylowy i,lub klopidogrel; wymagane jest ustalenie hamującego wpływu stosowanych leków na agregację płytek krwi oraz dokonanie oceny wpływu wybranych stężeń każdego z preparatów roślinnych i,lub ich frakcji w zakresie 10do100 µgnamL w badanym układzie eksperymentalnym, w celu określenia dopełniającego efektu hamowania funkcji płytek krwi ludzkiej poprzez wyżej wymienione preparaty roślinne i,lub ich frakcje; d)ocenę wpływu każdego z preparatów roślinnych i,lub ich frakcji na ekspresję receptorów błonowych związanych z inicjacją szlaków pobudzenia płytek krwi metodą cytofluorymetrii przepływowej; wymagane jest porównanie uzyskanych wyników z działaniem dopuszczonych do lecznictwa substancji przeciwpłytkowych czyli brokerów określonych receptorów płytkowych; badania należy wykonać na materiale pochodzącym od co najmniej 10 zdrowych ochotników, w wieku 20 do30 lat, nie stosujących na co najmniej 12 dni przed oddaniem krwi leków przeciwzapalnych, w szczególności zaburzających krzepnięcie krwi.3) PAKIET C USŁUGA BADAŃ OCENY SPRAWNOŚCI MECHANIZMÓW OSOCZOWEGO UKŁADU KRZEPNIĘCIA WE KRWI SZCZURÓW DLA PREPARATÓW ROŚLINNYCH ORAZ ICH FRAKCJI, WRAZ Z OCENĄ CYTOTOKSYCZNOŚCI WOBEC TKANEK SZCZURÓW. Pakiet C dotyczy wykonania badań mających na celu określenie sprawności mechanizmów osoczowego układu krzepnięcia we krwi zwierząt doświadczalnych (szczury rasy Wistar, samce z chowu wsobnego o masie ciała w przedziale 270 do360 g.). Materiał badawczy stanowić będą na bieżąco przekazywane Wykonawcy przez Zamawiającego różne preparaty roślinne (max. 10, oraz max. do 5 ich frakcji), zawierające substancje o charakterze polisacharydów, polifenoli oraz glikokoniugatów polifenolowo-polisacharydowych. Doświadczenia dotyczyć będą również oceny cytotoksyczności ww. preparatów roślinnych oraz ich frakcji wobec tkanek badanych zwierząt doświadczalnych, na których przeprowadzano ww. doświadczenia. Zakres zlecenia w Pakiecie C obejmuje:a)wykonanie badań na krwi zwierząt, nie mniejszej niż 5 sztuk, w przypadku grupy kontrolnej oraz nie mniejszej niż 5 sztuk w przypadku grup eksperymentalnych, dla każdego z nie więcej niż 3 preparatów roślinnych oraz nie więcej niż 5 ich frakcji, który powinien być podany domięśniowo doświadczalnej grupie zwierząt, a następnie próbki krwi powinny być pobierane zarówno od szczurów stanowiących grupę kontrolną, jak i od szczurów stanowiących grupy doświadczalne, w sekwencji czasowej trwającej 5 godzin, uwzględniając dla każdego badanego preparatu co najmniej 3 różne odstępy czasowe, wykonując eksperymenty z uwzględnieniem co najmniej 3krotnej powtarzalności eksperymentów, b)wykonanie pomiarów: czasu częściowej tromboplastyny po aktywacji (aPTT), czasu protrombinowego (PT), czasu trombinowego (TT) oraz pomiarów stężenia fibrynogenu, z co najmniej 3krotną powtarzalnością eksperymentów, dla zebranych próbek krwi, zarówno od grup doświadczalnych jak i grupy kontrolnej, a także wykonanie dla wszystkich próbek krwi zebranych w grupie kontrolnej oraz dla wybranych próbek krwi zebranych w grupach doświadczalnych, w przypadku kiedy którykolwiek preparat roślinny i-lub frakcja wykaże znaczącą aktywność w ww. testach, następujących badań:badania dotyczące aktywności osoczowych czynników krzepnięcia, takich jak czynniki II, V, VII, VIII, IX, X, XI, XII, badania dotyczące aktywności antytrombiny oraz pomiary aktywności białka C, z zastosowaniem substratów chromogennych, pomiary stężeń D-dimerów, metodą immunochemiczną z użyciem swoistych przeciwciał;c)wykonanie badań wpływu nie więcej niż 10 preparatów roślinnych oraz nie więcej niż 5 ich frakcji na reaktywność leukocytów krwi obwodowej pobranej od zwierząt stanowiących grupę kontrolną oraz pobranej od zwierząt, stanowiących wybrane grupy eksperymentalne, gdzie po podaniu preparatów roślinnych i.lub frakcji, wykażą one znaczącą aktywność w testach aPTT, PT oraz TT; każde z tych badań powinno zostać wykonane z co najmniej 3-krotną powtarzalnością eksperymentów, a należą do nich:badania pełnej morfologii krwi, w tym: RBC, Hb, Ht, RDW, MCV, MCH, MCHC, WBC, z uwzględnieniem udziału procentowego i wartości bezwzględnych poszczególnych frakcji leukocytów, PLT, MPV, PDW, PCT, PLCR,identyfikacja subpopulacji limfocytów przy użyciu przeciwciał monoklonalnych,badania zdolności fagocytarnej leukocytów z użyciem komórek drożdży Saccharomyces cerevisiae; określenie żywotności i fazy cyklu komórkowego leukocytów,badania zdolności granulocytów do produkcji aktywnych związków tlenu na podstawie zdolności redukcji błękitu nitrotetrazoliowego (NBT),badania zdolności komórek jednojądrzastych krwi do tworzenia radialnej segmentacji jąder;d)wykonanie badań mających na celu ocenę cytotoksyczności nie więcej niż 10 preparatów roślinnych oraz nie więcej niż 5 ich frakcji, wobec tkanek pobranych od zwierząt doświadczalnych, stanowiących grupy eksperymentalne, w porównaniu z tkankami zwierząt stanowiącymi grupę kontrolną; zakres badań przewiduje wykonanie oceny różnych narządów wewnętrznych, w tym co najmniej z płuc, mięśnia sercowego, wątroby oraz z nerek; tok prac powinien uwzględniać następujące czynności:pobranie narządów w trakcie sekcji zwłok zwierząt doświadczalnych, minimum 24godzinne utrwalenie w 4% zbuforowanym, roztworze formaliny,wycięcie skrawków do preparatykihistopatologicznej,odwodnienie preparatów w acetonie, ksylenie i szeregu alkoholowym,zatopienie skrawków w parafinowe bloczki i wykonanie skrawków mikrotomowych o grubości 4 µm,odparafinowanie i barwienie preparatów rutynową metodą hematoksylina i eozyna (HE),w celu weryfikacji obserwacji dwukrotne oglądanie preparatów w mikroskopie świetlnym i archiwizacja istotnych zmian przy pomocy kamery zintegrowanej z mikroskopem i komputerem.Ponadto Zamawiający na własny koszt zapewniać będzie na bieżąco Wykonawcy zwierzęta doświadczalne (szczury) w ilości i o parametrach określonych w niniejszym zamówieniu. Pierwsza dostawa szczurów nastąpi w ciągu 14 dni od zawarcia umowy z Wykonawcą.3.Wykonawca dostarczy (odrębnie dla każdego Pakietu, na który będzie zawarta z nim umowa) dokumentację dotyczącą prowadzonych badań, w formie wydruków oraz wersji elektronicznej, w formacie do odczytu i edycji z wykorzystaniem oprogramowania MS Office: a)Raport częściowy (co trzy miesiące), z każdej wykonanej serii badań, który uwzględni zagadnienia będące zapisem każdego z wykonanych eksperymentów, w postaci opisu metodyki jego,ich przygotowania i wykonania, wyników w formie danych liczbowych i,lub wykresów i,lub zarejestrowanych obrazów wraz z ich interpretacją.b)Raport końcowy, zawierający szczegółowy opis uzyskanych wyników, zarejestrowane obrazy, wykresy i tabele oraz wnioski z przeprowadzonych prac badawczych.c)Raporty przekazywane będą Zamawiającemu w terminie 5 dni odpowiednio: po zakończeniu każdych trzech miesięcy, po zakończeniu realizacji usługi. Zamawiający zastrzega sobie prawo do zgłaszania uwag do raportów częściowych i raportu końcowego (w terminie do 20 dni od daty przekazania poszczególnych raportów), do których Wykonawca ma obowiązek niezwłocznie ustosunkować się.d) Wykonawca jest zobowiązany do przygotowania końcowej prezentacji (w programie Ms Power Point lub Flash) przedstawiającej uzyskane wyniki i wnioski oraz przedstawienie jej na seminarium zorganizowanym w siedzibie Zamawiającego w terminie do 15 dni od daty przekazania Raportu końcowego.4.Dotyczy pakietu nr A, B i C W terminie do 3 miesięcy od dnia zawarcia umowy na realizację usługi, Wykonawca jest zobowiązany dostarczyć Zamawiającemu kopię (a na jego żądanie umożliwić też wgląd do oryginału) pozwolenia na prowadzenie badań z zakresie przedmiotowej umowy, wydanego przez właściwą Lokalną Komisję Etyczną (LKE). W przypadku braku uzyskania tego rodzaju pozwolenia, Zamawiający ma prawo rozwiązać umowę z Wykonawcą ze skutkiem natychmiastowym, a Wykonawcy nie będą z tego tytułu przysługiwać żadne roszczenia finansowe względem Zamawiającego. Ponadto do czasu okazania przez Wykonawcę pozwolenia LKE, Zamawiający nie dokona żadnych płatności na rzecz Wykonawcy. Koszt eksploatacji własnej aparatury laboratoryjnej, a także przewozu od Zamawiającego próbek materiałów poddawanych analizom pokrywany jest przez Wykonawcę w ramach powierzonej mu usługi. Zamawiający dostarcza drobne materiały laboratoryjne i odczynniki niezbędne do realizacji usługi. O potrzebie dostarczenia każdej kolejnej partii drobnych materiałów laboratoryjnych lub odczynników Wykonawca powinien pisemnie powiadamiać Zamawiającego co najmniej z 3 miesięcznym wyprzedzeniem.5.Dotyczy pakietu nr C Dodatkowo, w ciągu 3 miesięcy od dnia zawarcia umowy Zamawiający udostępni Wykonawcy na czas realizacji usługi czytnik ELISA zestaw wyposażony w detektor typu UVVis, wyposażony w moduł podgrzewania i wytrząsania, oprogramowanie do obróbki danych.